Trio Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401231

Descripción general

TRIO codifica Trio, un gran factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para Rho, con múltiples dominios, que activa las GTPasas de la familia Rac1 y RhoA para coordinar la remodelación del citoesqueleto de actina, el tráfico de membranas y la polaridad celular. Trio integra señales procedentes de receptores de la superficie celular hacia vías downstream que regulan el crecimiento de neuritas, la guía axonal y la organización sináptica, además de desempeñar funciones en la migración y la adhesión celular. La desregulación de la señalización de TRIO y las variantes que afectan la actividad GEF se han vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y a un comportamiento alterado de la red de GTPasas Rho en diversos contextos celulares, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar el control del citoesqueleto y la integración de señales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Trio (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRIO en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRIO junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRIO tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Trio.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRIO para la investigación de la señalización de Trio, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TRIO críticos para la función de Trio
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRIO para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Trio CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Trio CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRIO. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Trio (h) y el plásmido HDR Trio (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRIO para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRIO definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.