TRIM69 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404906

Descripción general

TRIM69 codifica una ligasa E3 de ubiquitina de la familia de motivos tripartitos (TRIM), caracterizada por dominios RING, B-box y de bobina enrollada (coiled-coil) que median interacciones proteína–proteína y señalización dependiente de ubiquitina. TRIM69 se ha implicado en la regulación de la inmunidad innata, incluida la modulación de vías estimuladas por interferón y de mecanismos de restricción antiviral, a través del control de la estabilidad de sus sustratos y de respuestas transcripcionales aguas abajo. Al influir en la ubiquitinación y la proteostasis, TRIM69 puede moldear respuestas celulares al estrés y redes de señalización que se entrecruzan con programas inflamatorios. La alteración de la actividad de la familia TRIM es ampliamente relevante para la desregulación inmunitaria y la señalización oncogénica, lo que convierte a TRIM69 en una diana útil para estudios mecanísticos en estos contextos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TRIM69 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TRIM69 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TRIM69 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TRIM69 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TRIM69.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TRIM69 para la investigación de la señalización de TRIM69, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TRIM69 críticos para la función de TRIM69
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TRIM69 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TRIM69 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TRIM69 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TRIM69. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TRIM69 (h) y el plásmido HDR TRIM69 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TRIM69 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TRIM69 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.