Partículas Lentivirales de Activación (h) TRIM29: sc-402144-LAC

TRIM29 (tripartite motif containing 29) codifica una proteína de la familia TRIM asociada a una ligasa E3 de ubiquitina, implicada en la regulación de la estabilidad proteica, las respuestas al estrés celular y los programas de diferenciación epitelial. TRIM29 interactúa con la señalización de la respuesta al daño del ADN y con procesos asociados a la cromatina, influyendo en la regulación transcripcional y en decisiones sobre el destino celular de manera dependiente del contexto. Se ha informado de una expresión alterada de TRIM29 en múltiples tipos de cáncer y se estudia por sus posibles funciones en la progresión tumoral, la invasión y los mecanismos de respuesta a terapias, así como en una homeostasis epitelial más amplia. Estas características convierten a TRIM29 en una diana útil para analizar la regulación ligada a la ubiquitina, las vías de integridad genómica y las redes de señalización oncogénica en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral TRIM29 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TRIM29 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TRIM29 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TRIM29, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TRIM29. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TRIM29 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.