TRIM29 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402144-LAC

TRIM29 (tripartite motif contenente 29) codifica una proteina della famiglia TRIM associata a un’E3 ubiquitin ligasi, implicata nella regolazione della stabilità proteica, nelle risposte cellulari allo stress e nei programmi di differenziamento epiteliale. TRIM29 interagisce con la segnalazione della risposta al danno al DNA e con processi associati alla cromatina, influenzando la regolazione trascrizionale e le decisioni sul destino cellulare in modo dipendente dal contesto. Un’espressione alterata di TRIM29 è stata riportata in molteplici tipi di tumore ed è studiata per i suoi ruoli nella progressione tumorale, nell’invasione e nei meccanismi di risposta alle terapie, oltre che nella più ampia omeostasi dell’epitelio. Queste caratteristiche rendono TRIM29 un bersaglio utile per analizzare la regolazione mediata dall’ubiquitina, le vie di integrità del genoma e le reti di segnalazione oncogenica in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale TRIM29 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di TRIM29 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale TRIM29 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione TRIM29, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di TRIM29. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo TRIM29 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.