TRIM2 Double Nickase Plasmid (h): sc-410495-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRIM2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRIM2 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRIM2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRIM2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRIM2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410495-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRIM2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410495-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TRIM2 kodiert eine E3-Ubiquitin-Ligase mit Tripartite-Motif, die am ubiquitinabhängigen Proteinabbau und an der Organisation des Zytoskeletts beteiligt ist und eine wichtige Rolle bei der Aufrechterhaltung neuronaler Funktionen spielt. Über seine RING-, B-Box- und Coiled-Coil-Domänen ist TRIM2 in Proteostase- und Stressantwort-Signalwege eingebunden, die Axonintegrität, synaptische Funktion und intrazellulären Transport prägen. Eine veränderte TRIM2-Aktivität wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht, was mit seiner Anreicherung im Nervensystem und seiner Rolle bei der Regulation der Stabilität zentraler neuronaler Substrate vereinbar ist. Diese Eigenschaften machen TRIM2 zu einem geeigneten Knotenpunkt für Studien zur Ubiquitin-Proteasom-Regulation, zur Zytoskelettdynamik und zu zelltypspezifischen Mechanismen der Vulnerabilität.
TRIM2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRIM2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRIM2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRIM2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRIM2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.