
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TRIM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-418426 | 20 µg | $397.00 | |||
TRIMPlasmídeo HDR (h) | sc-418426-HDR | 20 µg | $445.00 |
TRAT1 codifica o adaptador transmembranar 1 associado ao receptor de células T (TRIM), uma proteína de membrana que se localiza na sinapse imunológica e sustenta a estabilidade e a sinalização do complexo TCR/CD3. O TRIM participa de processos proximais de ativação das células T que influenciam cascatas de quinases a jusante, fluxo de cálcio, remodelamento do citoesqueleto e programas transcricionais que controlam a função efetora. Ao modular a intensidade do sinal e o tráfego de receptores, TRAT1 contribui para a homeostase imune e tem sido estudado no contexto de respostas de células T desreguladas. Assim, alterações na atividade de TRAT1/TRIM são relevantes para investigações mecanísticas da biologia de doenças mediadas pelo sistema imune e de fenótipos de sinalização de linfócitos.
O TRIM CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TRAT1 em human linhas celulares. Cada plasmídeo do conjunto coexpressa um sgRNA único, direcionado a um local distinto dentro do locus TRAT1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes, e codifica GFP para permitir a identificação fluorescente e o enriquecimento das células transfectadas com sucesso. Esta estratégia multiguia aumenta a probabilidade de induzir deslocamentos de quadro de leitura ou deleções que produzam um knockout funcional, oferecendo uma alternativa mais robusta às abordagens de guia único. As DSBs induzidas em múltiplos locais são resolvidas através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ) ou, quando utilizadas com o modelo doador HDR incluído, através da reparação dirigida por homologia (HDR) num local-alvo definido dentro do locus.
Quando utilizado em conjunto com o doador HDR que expressa RFP, a fluorescência de GFP e RFP pode ser utilizada em conjunto para distinguir populações de células transfectadas das editadas, simplificando os fluxos de trabalho de triagem e seleção de clones baseados em citometria de fluxo.
Para aplicações que requerem clones knockout confirmados e selecionáveis, o TRIM Plasmídeo HDR (h) inclui uma construção doadora HDR contendo uma cassete de resistência à puromicina (PuroR) e um repórter de proteína fluorescente vermelha (RFP), flanqueados por braços de homologia específicos para um local-alvo definido TRAT1.
Quando co-transfectado com o TRIM Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h):
A construção doadora HDR apresenta sítios loxP flanqueando a cassete de seleção PuroR-RFP para permitir a remoção limpa do marcador após a confirmação do clone. A expressão transitória da recombinase Cre através do Vetor Cre: sc-418923 incluído excisa a cassete, deixando um local loxP residual mínimo dentro do locus TRAT1 e eliminando potenciais efeitos de confusão em ensaios a jusante.
Esta abordagem em duas etapas:
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.