trichoplein Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407983

Descripción general

TCHP codifica la tricopleína, una proteína asociada a los centriolos y a los microtúbulos que regula la función del centrosoma y la dinámica del cilio primario, conectando la progresión del ciclo celular con la señalización ciliar. Se ha implicado a la tricopleína en el control de la ciliogénesis mediante interacciones con quinasas del ciclo celular y reguladores del centrosoma, influyendo en la organización del citoesqueleto y en la fidelidad mitótica. A través de sus efectos sobre las vías dependientes de cilios y la integridad del centrosoma, la actividad alterada de TCHP puede perturbar la proliferación, la diferenciación y las respuestas al estrés. La desregulación de la homeostasis cilio/centrosoma es relevante para estudios mecanísticos de trastornos del desarrollo y fenotipos asociados al cáncer, lo que convierte a TCHP en un nodo útil para la interrogación de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO trichoplein (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TCHP en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TCHP junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TCHP tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína trichoplein.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TCHP para la investigación de la señalización de trichoplein, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TCHP críticos para la función de trichoplein
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TCHP para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido trichoplein CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido trichoplein CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TCHP. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR trichoplein (h) y el plásmido HDR trichoplein (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TCHP para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TCHP definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.