Plasmide Double Nickase (m) Triadin: sc-429407-NIC

Trdn code la triadine, une protéine membranaire de la jonction du réticulum sarcoplasmique qui organise le couplage excitation–contraction dans le muscle strié en reliant le complexe du récepteur à la ryanodine à des protéines luminales liant le Ca²⁺, telles que la calséquestrine. Dans les cardiomyocytes et les myofibres squelettiques de souris, la triadine contribue à ajuster la cinétique de libération et de recapture intracellulaires du Ca²⁺, qui conditionne la force contractile, la réfractarité et la signalisation de l’homéostasie du Ca²⁺. Par son rôle dans l’architecture des microdomaines du réticulum sarcoplasmique, la triadine influence des voies dépendantes du Ca²⁺ qui régulent le développement musculaire, les réponses au stress et la stabilité électrophysiologique. Une altération de la fonction de TRDN est associée à des phénotypes d’arythmie héréditaire et à des caractéristiques myopathiques, faisant de Trdn une cible pertinente pour modéliser les défauts de gestion du Ca²⁺ et le remodelage du réticulum sarcoplasmique.

Triadin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Trdn dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Trdn. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Trdn. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Trdn.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.