Plásmido CRISPR de Activación (h) TRF1: sc-401433-ACT

TERF1 codifica el factor 1 de unión a repeticiones teloméricas (TRF1), un componente central del complejo shelterina que se une al ADN telomérico de doble cadena y regula la homeostasis de la longitud de los telómeros. TRF1 coordina la replicación telomérica y la protección de los extremos cromosómicos al modular el acceso de la telomerasa y favorecer la progresión adecuada de la horquilla de replicación a través de las repeticiones teloméricas, limitando así la fragilidad telomérica y la señalización aberrante de daño en el ADN. A través de sus funciones en los extremos cromosómicos, TRF1 se relaciona con vías de estabilidad genómica, incluidas las respuestas al daño del ADN mediadas por ATM/ATR y la segregación cromosómica mitótica. La actividad desregulada de TERF1/TRF1 se ha asociado con fenotipos de disfunción telomérica relevantes para la biología del envejecimiento y la genómica del cáncer, donde el mantenimiento telomérico alterado contribuye a la inestabilidad cromosómica.

TRF1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TERF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRF1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TERF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TERF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRF1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TERF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRF1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRF1 en células tumorales con expresión de TERF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.