Plasmide CRISPR d'Activation (h) TREX-1: sc-403875-ACT

Le gène humain **TREX1** code **TREX-1**, une exonucléase de l’ADN 3′→5′ qui dégrade l’ADN cytosolique simple brin et double brin afin de maintenir l’homéostasie du génome et de l’immunité innée. En éliminant des espèces d’ADN aberrantes générées lors du stress réplicatif, de la réparation de l’ADN et de l’activité des rétroéléments, TREX-1 limite l’activation de voies de détection des acides nucléiques telles que **cGAS–STING** ainsi que la signalisation en aval des **interférons de type I**. Une activité dérégulée de TREX1 est associée à une signalisation inflammatoire inappropriée et à des réponses altérées aux dommages de l’ADN, ce qui en fait un nœud clé reliant le métabolisme de l’ADN aux mécanismes de défense antivirale. TREX-1 est donc largement étudiée dans des contextes de pathologies pilotées par les interférons, de phénotypes associés à l’auto-immunité et de mécanismes qui façonnent les réponses cellulaires à l’ADN endogène et exogène.

TREX-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TREX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TREX-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TREX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TREX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TREX-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TREX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TREX-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TREX-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de TREX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.