TREX-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403875-ACT

Il gene umano **TREX1** codifica **TREX-1**, un’esonucleasi del DNA **3′→5′** che degrada il DNA citosolico a singolo e doppio filamento per mantenere l’omeostasi del genoma e dell’immunità innata. Eliminando specie di DNA aberranti generate durante lo stress replicativo, la riparazione del DNA e l’attività dei retroelementi, TREX-1 limita l’attivazione di vie di riconoscimento degli acidi nucleici come **cGAS–STING** e della conseguente segnalazione dell’interferone di tipo I. Un’attività di TREX1 deregolata è associata a una segnalazione infiammatoria inappropriata e a risposte alterate al danno del DNA, rendendolo un nodo chiave che collega il metabolismo del DNA ai meccanismi di difesa antivirale. TREX-1 è quindi ampiamente studiato in contesti di patologie guidate dall’interferone, fenotipi associati all’autoimmunità e meccanismi che modellano le risposte cellulari al DNA endogeno ed esogeno.

TREX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TREX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TREX-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TREX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TREX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TREX-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TREX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TREX-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TREX-1 nelle cellule tumorali con espressione di TREX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.