TREM-2 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-429903-ACT

Das murine Gen **Trem2** kodiert **TREM-2**, einen in Mikroglia und anderen Zellen der myeloischen Linie angereicherten Immunrezeptor, der das Überleben, die Chemotaxis sowie die phagozytische Beseitigung von Lipiden und zellulären Trümmern unterstützt. Über adaptorvermittelte Signalübertragung (vor allem über **TYROBP/DAP12**) aktiviert es nachgeschaltete, **SYK**-abhängige Signalwege, die den Entzündungsstatus, die Lipiderkennung und die metabolische Reprogrammierung prägen. Die Aktivität von TREM-2 moduliert Zustandsübergänge von Mikroglia während Gewebeschädigung und -remodellierung und wird breit in der Forschung zu Neuroinflammation und Neurodegeneration untersucht, ebenso wie in der Makrophagenbiologie peripherer Gewebe. Veränderte TREM-2-Signalgebung wurde mit dysregulierten angeborenen Immunantworten, beeinträchtigter Trümmerbeseitigung und Veränderungen krankheitsrelevanter mikroglialer Transkriptionsprogramme in Verbindung gebracht.

TREM-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Trem2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TREM-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Trem2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Trem2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TREM-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Trem2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TREM-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TREM-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Trem2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.