Plásmido CRISPR de Activación (m) TREM-1: sc-425490-ACT

El gen Trem1 de ratón codifica TREM-1, un inmunorreceptor de la familia TREM expresado predominantemente por células de la línea mieloide, como neutrófilos y monocitos/macrófagos. Mediante su asociación con el adaptador TYROBP/DAP12 y la señalización posterior dependiente de ITAM, TREM-1 amplifica las respuestas inflamatorias, promoviendo la producción de citocinas y quimiocinas y modulando la activación de la inmunidad innata. La señalización de TREM-1 se interconecta con vías de receptores de reconocimiento de patrones, incluidas las respuestas mediadas por receptores tipo Toll, para regular el reclutamiento de leucocitos, la desgranulación y el tono inflamatorio tisular. La actividad desregulada de TREM-1 se ha vinculado con inflamación excesiva tanto en contextos infecciosos como de inflamación estéril, lo que convierte a Trem1 en una diana relevante para estudios mecanísticos de inmunopatología impulsada por células mieloides.

TREM-1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Trem1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TREM-1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Trem1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Trem1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TREM-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Trem1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TREM-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TREM-1 en células tumorales con expresión de Trem1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.