TRB-3 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-432803-LAC

O Trib3 de camundongo codifica a TRB-3, uma pseudocinase cataliticamente inativa que atua como uma proteína-andaime induzível por estresse, modulando a sinalização intracelular. A TRB-3 é comumente associada à regulação da via insulina/IGF–PI3K–AKT por meio de interações proteína–proteína, moldando efeitos a jusante no metabolismo da glicose, na sobrevivência celular, na autofagia e em programas transcricionais durante o estresse do RE e a privação de nutrientes. Ela também se conecta a redes inflamatórias e de resposta ao estresse, incluindo a sinalização da resposta a proteínas mal dobradas (UPR) dirigida por ATF4/CHOP e a atividade de MAPK e NF-κB dependente do contexto. Alterações na expressão de TRB-3 têm sido associadas à desregulação metabólica, a processos relacionados à fibrose e à inflamação e a fenótipos adaptativos ao estresse em tumores, tornando o Trib3 um alvo relevante para estudos mecanísticos em modelos de biologia cardiometabólica e do câncer.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRB-3 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Trib3 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais TRB-3 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Trib3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de TRB-3. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Trib3 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.