Plasmide CRISPR d'Activation (h) TRB-3: sc-401746-ACT

TRIB3 (TRB-3) code une pseudokinase catalytiquement inactive qui agit comme un adaptateur sensible au stress, régulant l’intensité de la signalisation dans de multiples voies. TRB-3 module l’activité d’AKT/PKB et s’inscrit à l’interface des voies PI3K–AKT, MAPK et du stress du réticulum endoplasmique/UPR, influençant ainsi le métabolisme du glucose, l’homéostasie lipidique, l’autophagie et l’apoptose. Inductible en conditions de privation de nutriments et d’hypoxie, TRIB3 intègre des programmes transcriptionnels en aval d’ATF4/CHOP et d’autres régulateurs du stress, orientant les décisions de destinée cellulaire. Une expression dérégulée de TRIB3 a été associée à des dysfonctionnements métaboliques, à l’inflammation et à des contextes de signalisation liés aux tumeurs, ce qui étaye des études mécanistiques en biologie cardiométabolique et en cancérologie.

TRB-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TRIB3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TRB-3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TRIB3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TRIB3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TRB-3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TRIB3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TRB-3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TRB-3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TRIB3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.