TRB-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-405781-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRB-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRB-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und TRB-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TRIB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRB-1: sc-393536
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRB-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405781-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das humane TRIB1-Gen kodiert Tribbles-Pseudokinase 1 (TRB-1), ein katalytisch inaktives, kinaseähnliches Scaffold-Protein, das Signalausgänge moduliert, indem es E3-Ubiquitin-Ligasen rekrutiert und die Protein-Stabilität beeinflusst. TRB-1 ist an der Regulation der MAPK/ERK-Signalübertragung, an Transkriptionsprogrammen zur Kontrolle der myeloischen Differenzierung sowie an zellulären Stressantworten beteiligt – unter anderem über Interaktionen, die die Ubiquitinierung und den Turnover zentraler Komponenten dieser Signalwege steuern. Eine veränderte TRIB1-Expression wurde mit entgleistem Lipid- und Glukosestoffwechsel, inflammatorischer Signalgebung und der Festlegung hämatopoetischer Linien in Verbindung gebracht und damit mit Phänotypen, die für metabolische und kardiovaskuläre Merkmale sowie die Biologie myeloischer Malignome relevant sind. Diese Funktionen machen TRB-1 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um das Zusammenspiel zwischen Wachstumsfaktor-Signalgebung, Proteostase und transkriptioneller Kontrolle in humanen Zellen zu untersuchen.
TRB-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TRIB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TRIB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TRIB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TRIB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.