TRAP95 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405827

Panoramica

MED16 codifica TRAP95, una subunità essenziale del complesso Mediator che mette in comunicazione i fattori di trascrizione specifici di sequenza con l’RNA polimerasi II, coordinando l’espressione genica dipendente dagli stimoli. TRAP95 contribuisce a programmi di regolazione trascrizionale legati al controllo del ciclo cellulare, alla differenziazione e alla segnalazione di risposta allo stress, riflettendo il suo ruolo nell’integrare molteplici vie a monte a livello di promotori ed enhancer. Un’alterata funzione del Mediator, incluse le perturbazioni di MED16, è stata associata a un’ampia disregolazione trascrizionale osservata nel cancro e in altri disturbi dell’identità cellulare e dell’omeostasi. In quanto proteina regolatoria nucleare umana, TRAP95 è comunemente studiata per il suo contributo alle reti trascrizionali e al controllo dell’espressione genica associato alla cromatina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAP95 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MED16 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MED16 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MED16 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAP95.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MED16 per lo studio della segnalazione di TRAP95, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MED16 critici per la funzione di TRAP95
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MED16 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRAP95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRAP95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MED16. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRAP95 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRAP95 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MED16 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MED16 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.