TRAP230 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-404820-KO-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- TRAP230 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im TRAP230-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRAP230: sc-515695
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRAP230 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) | sc-404820-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
MED12 kodiert TRAP230, einen zentralen Bestandteil des Mediator-Komplexes, der sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der RNA-Polymerase II koppelt und die Initiation sowie Elongation der Transkription koordiniert. Über eine Mediator-abhängige Regulation beeinflusst TRAP230 Entwicklungs-Gentranskriptionsprogramme und Signalwege, darunter Wnt/β‑Catenin, TGF‑β und die durch nukleäre Rezeptoren vermittelte Transkription. Eine Störung von MED12 beeinträchtigt die chromatinasozierte transkriptionelle Kontrolle und verändert dadurch zelluläre Identität sowie proliferationsassoziierte Transkriptionsnetzwerke. Genetische Veränderungen in MED12 wurden mit mehreren krankheitsrelevanten Kontexten in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Mechanismen der Transkriptionsfehlregulation in menschlichen Zellen macht.
Das TRAP230 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MED12-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MED12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MED12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRAP230-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MED12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRAP230-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf MED12-Exone abzielen, die für die TRAP230-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere MED12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom TRAP230 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRAP230 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MED12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRAP230 HDR-Plasmid (h) und TRAP230 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MED12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MED12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.