TRAP100 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417318

Übersicht

MED24 kodiert TRAP100, eine essenzielle Untereinheit des Mediator-Komplexes, der sequenzspezifische Transkriptionsfaktoren mit der RNA-Polymerase II verbindet, um die Kommunikation zwischen Promotor und Enhancer sowie die Initiation der Transkription zu koordinieren. TRAP100 trägt zu signalabhängigen Programmen der Genregulation bei, darunter die durch nukleäre Rezeptoren gesteuerte Transkription sowie eine umfassendere, chromatinassoziierte Kontrolle von Zellzyklusprogression, Differenzierung und Stressantworten. Störungen von Mediator-Untereinheiten, einschließlich MED24, können Transkriptionsnetzwerke beeinträchtigen, die mit Entwicklungsanomalien und onkogener transkriptioneller Umprogrammierung verknüpft sind, wodurch MED24 einen nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung der signalwegweiten Kontrolle der Genexpression darstellt. Die Funktion von MED24/TRAP100 ist daher für Untersuchungen der Transkriptionsdysregulation in der Krebsbiologie und anderen Erkrankungen relevant, die durch veränderte genregulatorische Schaltkreise getrieben werden.

Das TRAP100 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MED24-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MED24-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MED24 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TRAP100-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MED24-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TRAP100-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MED24-Exone abzielen, die für die TRAP100-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MED24-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TRAP100 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TRAP100 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MED24-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TRAP100 HDR-Plasmid (h) und TRAP100 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MED24-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MED24-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.