Transketolase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423410

Übersicht

Das murine Gen **Tkt** kodiert die Transketolase, ein thiaminpyrophosphat-abhängiges Enzym, das reversible Kohlenstoffübertragungsreaktionen im nicht-oxidativen Zweig des Pentosephosphatwegs katalysiert. Durch die Umwandlung von Zuckerphosphaten unterstützt die Transketolase die Bereitstellung von Ribose-5-phosphat für die Nukleotidbiosynthese und trägt dazu bei, glykolytische und Pentosephosphat-Intermediate auszubalancieren, um den zellulären Redoxhaushalt sowie anabole Anforderungen aufrechtzuerhalten. Die TKT-Aktivität ist daher mit proliferationsassoziiertem Stoffwechsel, mitochondrialer und oxidativem Stressanpassung über NADPH-abhängige Prozesse sowie einer umfassenderen Kontrolle des Kohlenhydratflusses verknüpft. Eine veränderte Verschaltung des Pentosephosphatwegs und eine veränderte Transketolase-Expression wurden mit metabolischer Dysregulation und tumorassoziierten metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch **Tkt** ein nützliches Ziel für mechanistische Studien zur metabolischen Umprogrammierung darstellt.

Das Transketolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tkt-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tkt-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tkt nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Transketolase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tkt-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Transketolase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tkt-Exone abzielen, die für die Transketolase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tkt-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Transketolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Transketolase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tkt-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Transketolase HDR-Plasmid (m) und Transketolase HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tkt-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tkt-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.