Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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transgelin Double Nickase Plasmid (h): sc-401343-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das transgelin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- transgelin Double-Nickase-Plasmid (h) und transgelin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TAGLN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: transgelin: sc-53932
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
transgelin Double Nickase Plasmid (h) | sc-401343-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
transgelin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401343-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TAGLN kodiert Transgelin, ein aktinbindendes Protein, das in glatter Muskulatur und myofibroblastenähnlichen Zellen angereichert ist, filamentöses Aktin stabilisiert und die kontraktile Architektur unterstützt. Transgelin ist an der Umgestaltung des Zytoskeletts, der Regulation der Zellform und Motilitätsprogrammen stromabwärts von RhoA/ROCK und anderen Signalwegen der Aktindynamik beteiligt und beeinflusst dabei Adhäsion sowie Interaktionen mit der extrazellulären Matrix. Eine veränderte TAGLN-Expression wird häufig als Marker für die Differenzierung glatter Muskelzellen und phänotypisches Switching verwendet und wurde in verschiedenen Kontexten mit Veränderungen des Gewebeumbaus sowie der Tumor–Stroma-Biologie in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen TAGLN zu einem praktikablen Ziel, um zu untersuchen, wie Aktinorganisation und Kontraktilität Zellmigration, Mechanotransduktion und linienassoziierte Genprogramme steuern.
transgelin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TAGLN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TAGLN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TAGLN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TAGLN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.