Plásmido Doble Nickase (h) transgelin: sc-401343-NIC

TAGLN codifica transgelina, una proteína de unión a actina enriquecida en músculo liso y en células tipo miofibroblasto que estabiliza la actina filamentosa y sostiene la arquitectura contráctil. La transgelina participa en la remodelación del citoesqueleto, la regulación de la forma celular y los programas de motilidad aguas abajo de RhoA/ROCK y otras vías de dinámica de la actina, influyendo en la adhesión y en las interacciones con la matriz extracelular. La expresión alterada de TAGLN se usa con frecuencia como marcador de diferenciación de músculo liso y de cambio fenotípico, y se ha asociado con modificaciones en la remodelación tisular y en la biología tumor–estroma en múltiples contextos. Estas características hacen de TAGLN un objetivo práctico para analizar cómo la organización de la actina y la contractilidad controlan la migración celular, la mecanotransducción y los programas génicos asociados al linaje.

transgelin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TAGLN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TAGLN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TAGLN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TAGLN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.