Plásmido CRISPR de Activación (h) transgelin: sc-401343-ACT

TAGLN codifica transgelina, una proteína de unión a actina enriquecida en células de músculo liso que estabiliza y agrupa la actina filamentosa para sostener la arquitectura del citoesqueleto, la contractilidad y la forma celular. La transgelina participa en la remodelación del citoesqueleto de actina aguas abajo de RhoA/ROCK y de programas de mecanotransducción relacionados que coordinan la adhesión y la migración. Los cambios en la expresión de TAGLN se utilizan con frecuencia como marcador de diferenciación del músculo liso y de cambio fenotípico durante la remodelación vascular y en procesos asociados a fibrosis. También se han descrito niveles desregulados de transgelina en la biología del estroma asociado a tumores y en estados celulares invasivos, lo que vincula la reprogramación del citoesqueleto con comportamientos celulares relevantes para la enfermedad.

transgelin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TAGLN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

transgelin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TAGLN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TAGLN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de transgelin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TAGLN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de transgelin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía transgelin en células tumorales con expresión de TAGLN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.