Plásmido CRISPR de Activación (h) TRAF7: sc-404992-ACT

El TRAF7 humano codifica una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING y una proteína adaptadora dentro de la familia de factores asociados al receptor de TNF, que modula la transducción de señales mediante el control dependiente de ubiquitina de la estabilidad proteica y del ensamblaje de complejos. TRAF7 se ha vinculado con la regulación de procesos asociados a MAPK y NF-κB, modelando programas transcripcionales que influyen en las respuestas al estrés celular, la apoptosis y la señalización inflamatoria. A través de su actividad de ubiquitinación, TRAF7 puede afectar la comunicación cruzada entre la señalización de la inmunidad innata y las vías de factores de crecimiento que gobiernan la homeostasis celular. Se han descrito alteraciones de la función de TRAF7 y señalización desregulada en contextos relevantes para la biología tumoral y la fisiopatología del desarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos del cableado de las vías de señalización.

TRAF7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRAF7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRAF7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRAF7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRAF7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRAF7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRAF7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRAF7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRAF7 en células tumorales con expresión de TRAF7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.