Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
TRAF6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423497
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- TRAF6 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico TRAF6, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: TRAF6 Antibody (D-10): sc-8409
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
TRAF6 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423497 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Il gene murino *Traf6* codifica TRAF6, una ligasi E3 dell’ubiquitina e proteina adattatrice che integra la trasduzione del segnale a valle dei membri della superfamiglia del recettore del TNF e dei recettori Toll-like/IL-1, controllando le risposte immunitarie innate e adattative. TRAF6 catalizza eventi di ubiquitinazione legati a K63 che favoriscono l’assemblaggio dei complessi TAK1 e IKK, attivando la segnalazione NF-κB e MAPK e programmi trascrizionali che regolano infiammazione, sopravvivenza cellulare e differenziamento. È inoltre centrale nella via di segnalazione RANK/RANKL durante l’osteoclastogenesi e contribuisce alla regolazione dell’autofagia tramite funzioni di scaffolding dipendenti dall’ubiquitina. Una segnalazione TRAF6 deregolata è stata implicata in patologie infiammatorie, difetti del rimodellamento osseo e contesti di segnalazione oncogenica in cui sono prominenti l’attivazione di NF-κB/MAPK e la riprogrammazione delle vie dell’ubiquitina.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAF6 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Traf6 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Traf6 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Traf6 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAF6.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Traf6 per lo studio della segnalazione di TRAF6, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Traf6 critici per la funzione di TRAF6
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Traf6 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal TRAF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TRAF6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Traf6. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal TRAF6 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TRAF6 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Traf6 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Traf6 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.