TRAF6 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400117-ACT

TRAF6 (TNF-Rezeptor-assoziierter Faktor 6) ist eine RING-Typ-E3-Ubiquitin-Ligase und ein Adapterprotein, das Signale von Mitgliedern der TNF-Rezeptor-Superfamilie sowie von Toll-like/IL-1-Rezeptoren weiterleitet. Durch K63-verknüpfte Polyubiquitinierung von sich selbst und Partnerproteinen fördert TRAF6 die Aktivierung von TAK1 und der nachgeschalteten NF-κB- und MAPK-Signalwege und prägt damit die Expression inflammatorischer Gene, angeborene Immunantworten und Programme des Zellüberlebens. TRAF6 ist außerdem in die PI3K–AKT-Signalübertragung eingebunden und trägt über die RANK–RANKL-Signalisierung zur Osteoklastendifferenzierung bei, wodurch Immunregulation mit Knochenremodellierung verknüpft wird. Eine fehlregulierte TRAF6-Signalgebung wurde mit chronischen Entzündungen, Immundysfunktionen und der Aktivierung onkogener Signalwege in verschiedenen Tumorkontexten in Verbindung gebracht, was TRAF6 als mechanistischen Knotenpunkt in signalwegfokussierten Studien unterstützt.

TRAF6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRAF6-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRAF6 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRAF6-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRAF6-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRAF6-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRAF6-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRAF6-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRAF6-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRAF6-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.