TRAF4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401930-ACT

TRAF4 (TNF-Rezeptor-assoziierter Faktor 4) ist ein Adapterprotein und eine E3-Ubiquitin-Ligase, die die Signaltransduktion nachgeschaltet an mehreren Rezeptorklassen koordiniert, darunter Zytokinrezeptoren und Sensoren der angeborenen Immunität. Durch regulierte Ubiquitinierung sowie Scaffold-Funktionen beeinflusst TRAF4 die Dynamik der NF-κB- und MAPK-Signalwege, interagiert mit der TGF-β/SMAD-Signalkaskade und trägt zur Kontrolle von Zellpolarität, junctionaler Organisation und Migrationsverhalten bei. Eine veränderte TRAF4-Expression oder ein verschobenes Signalgleichgewicht wurde in Zusammenhängen von Entzündung und onkogenem Remodeling von Signalwegen beschrieben, wobei TRAF4 Transkriptionsprogramme modulieren kann, die mit epithelialer Plastizität verknüpft sind. Als Knotenpunkt in rezeptorproximalen Signalnetzwerken wird TRAF4 häufig im Hinblick auf Signalweg-Crosstalk, Stressantworten sowie Phänotypen untersucht, die mit Invasion und metastaseassoziierten Prozessen zusammenhängen.

TRAF4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TRAF4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TRAF4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TRAF4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TRAF4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TRAF4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TRAF4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TRAF4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TRAF4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TRAF4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.