Plásmido CRISPR de Activación (h) TRAF3: sc-400473-ACT

TRAF3 (factor 3 asociado al receptor de TNF) es un adaptador citoplasmático y una ligasa E3 de ubiquitina que acopla señales de miembros de la superfamilia de receptores de TNF, receptores tipo Toll y receptores tipo RIG-I a programas inflamatorios y antivirales posteriores. Modula nodos clave de señalización que controlan la inducción de interferón tipo I y la salida de las vías NF-κB y MAPK al regular el ensamblaje, dependiente de ubiquitina, de complejos próximos al receptor. En células inmunitarias, TRAF3 ayuda a equilibrar las respuestas innata y adaptativa, influyendo en la homeostasis de las células B, la producción de citocinas y el reconocimiento de patógenos. La actividad o expresión alteradas de TRAF3 se han vinculado con desregulación inmunitaria y fenotipos asociados a la inflamación, y con frecuencia se investiga en el contexto de la señalización oncogénica y la biología de las neoplasias hematológicas.

TRAF3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRAF3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRAF3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRAF3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRAF3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRAF3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRAF3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRAF3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRAF3 en células tumorales con expresión de TRAF3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.