Plasmide Double Nickase (h) TPX2: sc-402581-NIC

TPX2 (facteur de nucléation des microtubules TPX2) est un régulateur de l’assemblage du fuseau mitotique qui se localise aux microtubules mitotiques et favorise la nucléation et la stabilisation des microtubules via son interaction avec la kinase Aurora A et la voie RanGTP. En coordonnant la formation de microtubules indépendante des centrosomes, l’organisation des pôles du fuseau et la ségrégation des chromosomes, TPX2 contribue à assurer une progression mitotique fidèle et la stabilité génomique. Une expression ou une fonction dérégulée de TPX2 est associée à des défauts mitotiques, à l’aneuploïdie et à des phénotypes prolifératifs observés dans de multiples contextes tumoraux. Ces propriétés font de TPX2 une cible fréquemment étudiée dans le contrôle du cycle cellulaire, la régulation du point de contrôle mitotique et les réseaux de signalisation du cytosquelette dans les cellules humaines.

TPX2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TPX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TPX2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TPX2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TPX2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.