TPST-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423487

Descripción general

Tpst2 codifica la tirosilproteína sulfotransferasa 2 (TPST-2), una enzima residente del aparato de Golgi que cataliza la O-sulfatación postraduccional de residuos de tirosina en proteínas secretadas y de membrana, utilizando PAPS como donante de sulfato. Esta modificación modula las interacciones proteína–proteína y el reconocimiento receptor–ligando, influyendo en la señalización de quimiocinas, el tráfico de leucocitos y otros procesos de comunicación extracelular. La actividad de TPST-2 contribuye a la correcta maduración y función de múltiples hormonas peptídicas y moléculas de adhesión, vinculando la sulfatación dependiente de Tpst2 con la homeostasis inmunitaria y endocrina. La desregulación de la sulfatación de tirosina se ha asociado con cambios en la señalización inflamatoria y fenotipos reproductivos, lo que convierte a Tpst2 en un punto de interés para estudiar redes de señalización dependientes de la sulfatación en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TPST-2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tpst2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tpst2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tpst2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TPST-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tpst2 para la investigación de la señalización de TPST-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tpst2 críticos para la función de TPST-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tpst2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TPST-2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TPST-2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tpst2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TPST-2 (m) y el plásmido HDR TPST-2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tpst2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tpst2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.