Partículas Lentivirales de Activación (h) TPPP3: sc-405113-LAC

TPPP3 (miembro 3 de la familia de proteínas promotoras de la polimerización de tubulina) codifica una proteína asociada a microtúbulos implicada en la regulación de la polimerización de los microtúbulos, la organización del citoesqueleto y el transporte intracelular. A través de sus efectos sobre la dinámica de los microtúbulos, TPPP3 puede influir en procesos como la función del huso mitótico, la polaridad celular y el comportamiento migratorio, que están estrechamente acoplados al control del ciclo celular y a los programas de diferenciación epitelial. Se ha informado de una expresión alterada de TPPP3 en múltiples contextos oncológicos, lo que respalda su utilidad como marcador molecular para estudiar el estado de las células tumorales, la proliferación y la remodelación del citoesqueleto. Estas propiedades convierten a TPPP3 en una diana relevante para investigar vías dependientes de microtúbulos y cambios de fenotipo en modelos celulares humanos.

Las partículas de activación lentiviral TPPP3 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TPPP3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TPPP3 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TPPP3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TPPP3. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TPPP3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.