Plasmide CRISPR d'Activation (h) TP53INP2: sc-405261-ACT

TP53INP2 (tumor protein p53 inducible nuclear protein 2) est une protéine sensible au stress impliquée dans la régulation de l’autophagie et le trafic intracellulaire. Des rôles lui ont été attribués dans l’organisation de la biogenèse des autophagosomes et le soutien de programmes d’autophagie sélective. Elle a été associée à une navette cytoplasme-noyau et à des interactions avec la machinerie de l’autophagie, reliant les réponses au stress dépendantes de p53 au remodelage catabolique. Par ces fonctions, TP53INP2 peut influencer l’homéostasie cellulaire en conditions de privation nutritive et d’autres stress, en impactant des voies qui gouvernent la survie, le métabolisme et le contrôle qualité. Une autophagie et une signalisation du stress dérégulées impliquant TP53INP2 sont pertinentes pour des études mécanistiques en biologie du cancer, dans la neurodégénérescence et dans des phénotypes inflammatoires où la protéostasie et l’adaptation métabolique sont perturbées.

TP53INP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TP53INP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TP53INP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TP53INP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TP53INP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TP53INP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TP53INP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TP53INP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TP53INP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de TP53INP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.