TP53INP1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402835-ACT

TP53INP1 (tumor protein p53 inducible nuclear protein 1) è una proteina nucleare sensibile allo stress, indotta da p53 e da programmi trascrizionali correlati in condizioni di danno al DNA e stress ossidativo. Modula il controllo del ciclo cellulare, l’apoptosi e l’autofagia attraverso interazioni che influenzano gli output trascrizionali dipendenti da p53 e reti più ampie di adattamento allo stress. Un’espressione alterata di TP53INP1 è stata associata a una disregolazione della segnalazione dello stress, della proliferazione e delle vie di sopravvivenza, frequentemente perturbate nella biologia del cancro e in contesti infiammatori. In quanto regolatore nodale delle risposte cellulari allo stress, TP53INP1 è comunemente studiata per il suo impatto sulla regolazione dei checkpoint, sull’integrità mitocondriale e sulla riprogrammazione trascrizionale in condizioni genotossiche.

TP53INP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TP53INP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TP53INP1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TP53INP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TP53INP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TP53INP1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TP53INP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TP53INP1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TP53INP1 nelle cellule tumorali con espressione di TP53INP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.