Plásmido CRISPR de Activación (h) TP53INP1: sc-402835-ACT

TP53INP1 (proteína nuclear 1 inducible por p53) es una proteína nuclear sensible al estrés, inducida por p53 y por programas transcripcionales relacionados durante el daño del ADN y el estrés oxidativo. Modula el control del ciclo celular, la apoptosis y la autofagia mediante interacciones que influyen en las salidas transcripcionales dependientes de p53 y en redes más amplias de adaptación al estrés. La expresión alterada de TP53INP1 se ha vinculado con una señalización del estrés desregulada, así como con vías de proliferación y supervivencia que con frecuencia se ven perturbadas en la biología del cáncer y en contextos inflamatorios. Como regulador nodal de las respuestas celulares al estrés, TP53INP1 se estudia comúnmente por su impacto en la regulación de los puntos de control, la integridad mitocondrial y la reprogramación transcripcional en condiciones genotóxicas.

TP53INP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TP53INP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TP53INP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TP53INP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TP53INP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TP53INP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TP53INP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TP53INP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TP53INP1 en células tumorales con expresión de TP53INP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.