TorsinA Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424414

Descripción general

Tor1a codifica torsinaA, una ATPasa AAA+ que se localiza en el retículo endoplásmico y la envoltura nuclear, donde contribuye a la integridad de la envoltura nuclear, la proteostasis y la remodelación asociada a membranas mediante interacciones con LAP1 y LULL1. En células de ratón, la actividad de torsinaA se relaciona con la regulación del transporte nucleocitoplasmático, las respuestas al estrés del retículo endoplásmico y el control de calidad de proteínas mal plegadas. La alteración de la función de TOR1A se asocia con disfunción neuronal y fenotipos relacionados con distonía, lo que la hace relevante para estudios de la biología de los circuitos motores y la adaptación celular al estrés. Tor1a también se utiliza como locus modelo para investigar cómo las perturbaciones de la envoltura nuclear influyen en el acoplamiento con el citoesqueleto y el tráfico intracelular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TorsinA (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tor1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tor1a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tor1a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TorsinA.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tor1a para la investigación de la señalización de TorsinA, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tor1a críticos para la función de TorsinA
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tor1a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TorsinA CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TorsinA CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tor1a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TorsinA (m) y el plásmido HDR TorsinA (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tor1a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tor1a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.