Topo IIIβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423472

Übersicht

Top3b kodiert die DNA-Topoisomerase III beta (Topo IIIβ), eine Topoisomerase vom Typ IA, die topologischen Stress und Rekombinationsintermediate während der Genomerhaltung auflöst. In Mauszellen wird Topo IIIβ mit der Wahrung der Nukleinsäureintegrität in Verbindung gebracht, unter anderem durch Funktionen in der DNA-Reparatur, in Stressantworten im Zusammenhang mit der Replikation sowie in der Regulation des RNA-Stoffwechsels – im Einklang mit ihrer Fähigkeit, sowohl auf DNA- als auch auf RNA-Substraten zu wirken. Diese Aktivitäten überschneiden sich mit Signalwegen, die Transkriptions-Replikations-Konflikte und eine rekombinationsgetriebene Genomstabilität steuern – Prozesse, die die zelluläre Homöostase beeinflussen. Störungen der Top3b-abhängigen Nukleinsäureprozessierung wurden mit Phänotypen genomischer Instabilität assoziiert und sind für Untersuchungen zu neuroentwicklungsbezogenen und krebsrelevanten Mechanismen in Modellsystemen von Bedeutung.

Das Topo IIIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Top3b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Top3b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Top3b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Topo IIIβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Top3b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Topo IIIβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Top3b-Exone abzielen, die für die Topo IIIβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Top3b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Topo IIIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Topo IIIβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Top3b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Topo IIIβ HDR-Plasmid (m) und Topo IIIβ HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Top3b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Top3b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.