Topo IIIα Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404439

Descripción general

TOP3A codifica la topoisomerasa IIIα humana del ADN, una topoisomerasa de tipo IA que resuelve intermediarios topológicos de ADN monocatenario durante la replicación, la recombinación y la reparación del ADN. La Topo IIIα funciona en el complejo BTRR junto con BLM, RMI1 y RMI2 para disolver dobles uniones de Holliday, suprimir eventos de entrecruzamiento aberrantes y mantener la estabilidad del genoma durante la recombinación homóloga. También contribuye al mantenimiento del ADN mitocondrial mediante su cooperación con factores de replicación y reparación específicos del orgánulo, vinculando a TOP3A con la integridad de los genomas nuclear y mitocondrial. La alteración de las vías asociadas a TOP3A es relevante para fenotipos de inestabilidad genómica y se ha relacionado con trastornos hereditarios caracterizados por reparación defectuosa del ADN y sensibilidad al estrés replicativo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Topo IIIα (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TOP3A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TOP3A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TOP3A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Topo IIIα.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TOP3A para la investigación de la señalización de Topo IIIα, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TOP3A críticos para la función de Topo IIIα
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TOP3A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Topo IIIα CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TOP3A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Topo IIIα (h) y el plásmido HDR Topo IIIα (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TOP3A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TOP3A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.