Plasmide Double Nickase (h) Topo IIβ: sc-400773-NIC

TOP2B code la topoisomérase IIβ (Topo IIβ) humaine, une enzyme ATP‑dépendante qui résout le surenroulement de l’ADN et les caténanes en générant des cassures transitoires double brin puis en ressoudant l’ADN. Topo IIβ joue un rôle important dans la régulation transcriptionnelle, la topologie de la chromatine et la bonne progression de la réplication de l’ADN ainsi que de la ségrégation des chromosomes, ce qui la relie aux voies de réponse aux dommages de l’ADN et de stabilité du génome. Son activité recoupe des processus tels que la décaténation des chromatides sœurs, la dissipation des contraintes torsionnelles pendant la transcription et le maintien de la structure de la chromatine à un niveau d’organisation supérieur. Une dérégulation de la fonction de TOP2B ou des cassures d’ADN aberrantes médiées par la topoisomérase II a été associée à l’instabilité génomique et à des programmes d’expression génique altérés, étudiés en biologie du cancer et dans des modèles de neurodéveloppement.

Topo IIβ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TOP2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TOP2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TOP2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TOP2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.