Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Tom70 Double Nickase Plasmid (m): sc-424331-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Tom70 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Tom70 Double-Nickase-Plasmid (m) und Tom70 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Tomm70a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Tom70: sc-390545
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Tom70 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424331-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Tomm70a* kodiert Tom70, einen Importrezeptor der äußeren Mitochondrienmembran, der interne Targeting-Signale erkennt und mit Chaperonen zusammenarbeitet, um hydrophobe Vorläuferproteine an den TOM‑Komplex zu übergeben und deren Translokation zu ermöglichen. Tom70 unterstützt die mitochondriale Proteostase und die bioenergetische Leistungsfähigkeit, indem es den Import von Carrier-Proteinen und weiteren nukleär kodierten mitochondrialen Komponenten erleichtert, und ist damit mit der oxidativen Phosphorylierung und metabolischer Anpassung verknüpft. Störungen des Tom70‑abhängigen Imports können mitochondriale Stresssignalwege fördern, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies verändern und zu einer Umgestaltung von Apoptose‑ und angeborenen Immunwegen an den Mitochondrien führen. Eine fehlregulierte mitochondriale Proteinimportmaschinerie und die Funktion von Rezeptoren der äußeren Membran sind relevant für Mechanismen, die bei Neurodegeneration, kardiometabolischer Dysfunktion und dem Stoffwechsel von Krebszellen untersucht werden.
Tom70 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Tomm70a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Tomm70a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Tomm70a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Tomm70a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.