Plásmido Doble Nickase (h) Tom70: sc-402022-NIC

TOMM70 codifica Tom70, un receptor de importación de la membrana externa mitocondrial que reconoce preproteínas citosólicas y transportadores hidrofóbicos unidos a chaperonas, coordinando su entrega al complejo TOM para su translocación al interior de la mitocondria. Al apoyar la biogénesis de componentes de la cadena respiratoria y la proteostasis mitocondrial, Tom70 contribuye a la capacidad de fosforilación oxidativa, la dinámica del orgánulo y la adaptación celular al estrés. La función alterada de TOMM70 se ha estudiado en contextos de disfunción mitocondrial y neurodegeneración, y puede influir en la señalización inmunitaria innata en la mitocondria al modular la disponibilidad y la organización de factores importados que interactúan con vías antivirales dependientes de MAVS. Estas características hacen de TOMM70 una diana útil para investigar la importación de proteínas mitocondriales, la remodelación metabólica y los circuitos de respuesta al estrés relevantes para fenotipos de enfermedades complejas.

Tom70 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus TOMM70 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de TOMM70. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de TOMM70. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con TOMM70 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.