Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tom1 (m): sc-423467
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Tom1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Tom1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Tom1 Antibody (H-5): sc-514430
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tom1 (m) | sc-423467 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Tom1 (cible de Myb1) code une protéine adaptatrice endosomale qui couple des cargos ubiquitinylés à la machinerie de trafic associée à l’ESCRT, contribuant à la maturation des endosomes et au tri vers les lysosomes. Par ses interactions avec des composants liés à la clathrine et à l’ESCRT, TOM1 participe à la régulation du renouvellement des récepteurs, de l’homéostasie des protéines membranaires et de l’atténuation de la signalisation après endocytose. Ces processus recoupent la fonction autophagie–lysosome et la signalisation de l’immunité innée, ce qui fait de Tom1 un gène pertinent pour étudier comment le transport vésiculaire module l’inflammation et les réponses cellulaires au stress. Un tri endosomal dérégulé et un trafic dépendant de l’ubiquitine sont fréquemment associés à des phénotypes neuro-inflammatoires et neurodégénératifs, ainsi qu’à une dérégulation immunitaire dans des modèles murins.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tom1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tom1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tom1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tom1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tom1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tom1 pour l'étude de la signalisation de Tom1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Tom1 essentiels à la fonction de Tom1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tom1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Tom1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Tom1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tom1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Tom1 plasmide HDR (m) et le Tom1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tom1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tom1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.