Plásmido CRISPR de Activación (h) TNF-R2: sc-400709-ACT

TNFRSF1B codifica el receptor 2 del factor de necrosis tumoral (TNF-R2), un miembro de la familia de receptores de TNF que se expresa de forma preferente en linajes inmunitarios y endoteliales y que se activa por TNF unido a la membrana. La señalización de TNF-R2 recluta adaptadores TRAF para modular las vías canónica y no canónica de NF-κB, así como las vías MAPK y PI3K/AKT, configurando programas de supervivencia celular, proliferación y citocinas inflamatorias. Además de sus funciones inmunorreguladoras, TNF-R2 influye en la remodelación tisular y en las respuestas angiogénicas mediante el crosstalk con redes de apoptosis y de respuesta al estrés. La actividad desregulada de TNFRSF1B se ha asociado con afecciones inflamatorias y autoinmunes, patología vascular y la biología del microambiente tumoral-inmunitario, lo que lo hace relevante para estudios mecanísticos de la homeostasis inmunitaria y la inflamación crónica.

TNF-R2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TNFRSF1B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TNF-R2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TNFRSF1B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TNFRSF1B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TNF-R2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TNFRSF1B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TNF-R2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TNF-R2 en células tumorales con expresión de TNFRSF1B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.