TNF-R2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400709-ACT

TNFRSF1B codifica o receptor 2 do fator de necrose tumoral (TNF-R2), um membro da família de receptores de TNF expresso preferencialmente em linhagens imunológicas e endoteliais e ativado pelo TNF ligado à membrana. A sinalização do TNF-R2 recruta adaptadores TRAF para modular as vias canônica e não canônica de NF-κB, MAPK e PI3K/AKT, moldando programas de sobrevivência celular, proliferação e citocinas inflamatórias. Além de funções imunorregulatórias, o TNF-R2 influencia o remodelamento tecidual e respostas angiogênicas por meio de interações com redes de apoptose e de resposta ao estresse. A atividade desregulada de TNFRSF1B tem sido associada a condições inflamatórias e autoimunes, patologia vascular e à biologia do microambiente tumor–imune, o que o torna relevante para estudos mecanísticos de homeostase imunológica e inflamação crônica.

TNF-R2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TNFRSF1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TNF-R2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TNFRSF1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TNFRSF1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TNF-R2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TNFRSF1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TNF-R2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TNF-R2 em células tumorais com expressão de TNFRSF1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.