Plasmide Double Nickase (h) TNF-R1: sc-400206-NIC

TNFRSF1A code TNF‑R1, un récepteur exprimé de façon ubiquitaire qui se lie au TNF‑α pour initier une transduction du signal régissant l’inflammation, la survie cellulaire et la mort cellulaire programmée. La liaison du ligand favorise l’assemblage de complexes associés au récepteur, capables d’activer les voies canoniques NF‑κB et MAPK afin d’induire des programmes géniques de cytokines et de réponse au stress, ou, dans certains contextes régulatoires, d’orienter la signalisation vers l’apoptose et la nécroptose dépendantes des caspases. Par ces bifurcations de voie, TNF‑R1 influence l’activation de l’immunité innée, l’homéostasie tissulaire, ainsi que les réponses des barrières endothéliales et épithéliales. Une signalisation TNFRSF1A dérégulée et des variants altérant la fonction du récepteur ont été associés à des phénotypes auto‑inflammatoires et à des mécanismes plus larges de maladies inflammatoires, ce qui en fait une cible fréquente pour disséquer le comportement des réseaux pilotés par le TNF.

TNF-R1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TNFRSF1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TNFRSF1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TNFRSF1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TNFRSF1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.