TNFβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421477
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TNFβ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TNFβ, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TNFβ Anticuerpo (E-6): sc-28345
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TNFβ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421477 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Lta codifica el factor de necrosis tumoral beta (TNFβ, también conocido como linfotoxina-α), una citocina de la superfamilia del TNF producida principalmente por linfocitos activados, que señaliza a través de TNFR1/TNFR2 y contribuye a la organogénesis de los órganos linfoides y a la comunicación inflamatoria cruzada. TNFβ activa las vías canónicas de señalización de NF-κB y MAPK para regular la supervivencia de los leucocitos, las redes de citocinas y la expresión de moléculas de adhesión, modulando el tráfico de células inmunitarias y la remodelación tisular. En sistemas murinos, la función de Lta está estrechamente vinculada a la organización de estructuras linfoides secundarias y a la coordinación de las respuestas inmunitarias adaptativas. La señalización desregulada de TNFβ se examina con frecuencia en modelos de inflamación crónica, autoinmunidad y microambientes inmunitarios asociados a tumores, donde se alteran las interacciones entre el estroma y el sistema inmunitario.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TNFβ (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lta en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lta junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lta tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TNFβ.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lta para la investigación de la señalización de TNFβ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Lta críticos para la función de TNFβ
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lta para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TNFβ CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TNFβ CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lta. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TNFβ (m) y el plásmido HDR TNFβ (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lta para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lta definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.