Plasmide CRISPR d'Activation (h) TNFα-IP 8L3: sc-410450-ACT

TNFAIP8L3 (TNFα-IP 8L3) est un membre de la famille TNFAIP8/TIPE, impliquée dans la régulation de la signalisation liée à l’immunité, de la survie cellulaire et des réponses inflammatoires en aval de la stimulation par des cytokines. Dans les cellules humaines, TNFAIP8L3 a été associé à la modulation des seuils d’apoptose et des voies d’adaptation au stress, avec des liens fonctionnels avec des programmes transcriptionnels dépendants de NF-κB ainsi qu’avec l’activité plus large de réseaux pilotés par le TNF. Des altérations de l’expression des protéines de la famille TIPE ont été rapportées dans divers contextes de dérégulation de l’inflammation et de phénotypes oncogéniques, ce qui justifie l’étude de TNFAIP8L3 dans la biologie du microenvironnement tumoral et la signalisation des cellules immunitaires. L’étude de TNFAIP8L3 peut aider à préciser comment des régulateurs sensibles aux cytokines façonnent la prolifération, la signalisation de la mort cellulaire et l’homéostasie cellulaire.

TNFα-IP 8L3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TNFAIP8L3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

TNFα-IP 8L3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TNFAIP8L3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TNFAIP8L3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de TNFα-IP 8L3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TNFAIP8L3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de TNFα-IP 8L3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie TNFα-IP 8L3 dans les cellules tumorales présentant une expression de TNFAIP8L3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.