Plasmide CRISPR/Cas9 KO TNFα-IP 8 (h): sc-411806

Présentation

TNFAIP8 code la protéine 8 induite par le TNFα (TNFα‑IP 8), un régulateur cytoplasmique de la survie cellulaire et de la signalisation inflammatoire, induit par le TNFα et d’autres stimuli immunitaires. TNFα‑IP 8 a été associée à la modulation de l’apoptose, des réponses liées à NF‑κB et de programmes d’adaptation au stress qui influencent la prolifération cellulaire, la migration et l’homéostasie immunitaire. Une expression altérée de TNFAIP8 a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, en particulier dans des signatures transcriptionnelles associées au cancer et à l’inflammation. Par conséquent, TNFAIP8 est fréquemment étudié comme un nœud reliant la signalisation induite par les cytokines à des phénotypes tels que la résistance à la mort cellulaire et des modifications de la motilité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TNFα-IP 8 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNFAIP8 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNFAIP8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNFAIP8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TNFα-IP 8.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNFAIP8 pour l'étude de la signalisation de TNFα-IP 8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TNFAIP8 essentiels à la fonction de TNFα-IP 8
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNFAIP8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TNFα-IP 8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TNFα-IP 8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNFAIP8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TNFα-IP 8 plasmide HDR (h) et le TNFα-IP 8 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNFAIP8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNFAIP8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.