TMPRSS4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-416288-ACT

TMPRSS4 (transmembrane serine protease 4) ist eine Serinprotease vom Typ II mit Transmembrandomäne, die an der Zelloberfläche exprimiert wird und dort die perizelluläre Proteolyse, den Umbau der extrazellulären Matrix sowie das Verhalten epithelialer Zellen modulieren kann. Durch die Beeinflussung proteaseaktivierter Signalwege und von Zell‑Zell- bzw. Zell‑Matrix-Interaktionen ist TMPRSS4 mit Prozessen wie Migration, Invasion und epithelial‑mesenchymaler Transition (EMT) verknüpft. Eine veränderte TMPRSS4-Expression wurde in zahlreichen soliden Tumoren beschrieben und ist häufig mit aggressiven Phänotypen und metastatischem Potenzial assoziiert, was TMPRSS4 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien invasionsbezogener Programme macht. TMPRSS4 ist außerdem relevant für die Erforschung membranverankerter Proteasenetzwerke, die die Prozessierung von Rezeptoren und die nachgeschaltete Signalübertragung in epithelialen Geweben regulieren.

TMPRSS4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TMPRSS4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TMPRSS4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TMPRSS4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TMPRSS4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TMPRSS4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TMPRSS4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TMPRSS4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TMPRSS4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TMPRSS4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.