TMPIT Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431998

Descripción general

Tmem120a codifica TMPIT, una proteína de membrana de múltiples pasos asociada predominantemente con la envoltura nuclear y el retículo endoplásmico, donde se ha vinculado con el metabolismo lipídico y programas de mecanotransducción celular. Diversos estudios implican a TMPIT en la diferenciación de adipocitos y en la regulación del almacenamiento de lípidos, conectando a Tmem120a con vías que controlan la composición lipídica de la membrana y la homeostasis metabólica. Las alteraciones en la función de TMPIT se han explorado en el contexto de la biología del tejido adiposo, fenotipos asociados a la obesidad y mecanismos sensoriales periféricos relacionados con estímulos mecánicos. En sistemas de modelos murinos, la perturbación de Tmem120a ofrece una vía para investigar cómo las proteínas asociadas a membrana moldean la expresión génica y la función de los orgánulos en tejidos metabólicamente activos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TMPIT (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Tmem120a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Tmem120a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Tmem120a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TMPIT.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Tmem120a para la investigación de la señalización de TMPIT, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Tmem120a críticos para la función de TMPIT
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Tmem120a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TMPIT CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TMPIT CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Tmem120a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TMPIT (m) y el plásmido HDR TMPIT (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Tmem120a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Tmem120a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.