Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM98: sc-409870-ACT

TMEM98 codifica una proteína transmembrana multipaso enriquecida en tejidos oculares y neuronales, donde se ha implicado en la regulación de la señalización asociada a membranas y de la homeostasis celular. En humanos, TMEM98 se ha vinculado a procesos que influyen en la organización de la matriz extracelular y en los patrones del desarrollo, en consonancia con funciones en la morfogénesis tisular y la comunicación célula‑célula. Estudios genéticos asocian variaciones en TMEM98 con fenotipos oculares hereditarios, incluidas anomalías del nervio óptico y del segmento anterior, lo que respalda su relevancia para los mecanismos que determinan la estructura de la retina y del nervio óptico. Estas características convierten a TMEM98 en una diana útil para estudiar cómo las proteínas de membrana ajustan programas transcripcionales y señales del microambiente durante el desarrollo y en la remodelación asociada a enfermedad.

TMEM98 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM98 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM98 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM98 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM98, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM98. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM98 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM98 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM98 en células tumorales con expresión de TMEM98 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.