Partículas Lentivirales de Activación (h) TMEM97: sc-411997-LAC

TMEM97 codifica la proteína transmembrana 97, un componente residente del retículo endoplásmico del complejo del receptor sigma-2 que modula la homeostasis del colesterol celular y el transporte de lípidos. TMEM97 se ha vinculado a la regulación de la captación de lipoproteínas de baja densidad (LDL) mediante interacciones con receptores de lipoproteínas y a procesos más amplios de organización de membranas que influyen en la señalización y la adaptación metabólica. Al moldear la distribución de esteroles y la proteostasis en la vía secretora, TMEM97 puede afectar las redes de respuesta al estrés y la función de los orgánulos. Los cambios en la expresión de TMEM97 y la biología asociada al receptor sigma-2 se han investigado en contextos que incluyen la neurodegeneración, la desregulación metabólica y los cambios de estado celular relacionados con el cáncer, lo que respalda su utilidad como diana mecanística en estudios de vías.

Las partículas de activación lentiviral TMEM97 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TMEM97 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral TMEM97 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TMEM97, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de TMEM97. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TMEM97 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.