Plásmido CRISPR de Activación (h) TMEM8C: sc-402487-ACT

TMEM8C, también conocido como myomaker, codifica una proteína transmembrana multipaso que es esencial para la fusión de mioblastos durante el desarrollo y la regeneración del músculo esquelético. Actúa en la membrana plasmática para promover la actividad fusogénica y se coordina con redes reguladoras miogénicas y con procesos de remodelado de membrana necesarios para la formación de miotubos multinucleados. La expresión de TMEM8C está estrechamente vinculada a los programas de diferenciación en las células musculares, lo que lo convierte en un punto de entrada útil para estudiar el control transcripcional de la miogénesis y los mecanismos de fusión célula–célula. La desregulación de la fusión de mioblastos y de las vías asociadas a TMEM8C es relevante en modelos experimentales de atrofia muscular y miopatías hereditarias en las que una formación o reparación muscular deficiente constituye un fenotipo celular clave.

TMEM8C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TMEM8C sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TMEM8C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TMEM8C en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TMEM8C, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TMEM8C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TMEM8C y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TMEM8C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TMEM8C en células tumorales con expresión de TMEM8C silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.