Plasmide Double Nickase (h) TMEM66: sc-412236-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) TMEM66 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide TMEM66 Double Nickase (h) et le plasmide TMEM66 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant SARAF. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) TMEM66 | sc-412236-NIC | 20 µg | $410.00 |
SARAF (facteur régulateur associé à la SOCE), également connu sous le nom de TMEM66, est une protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui module l’entrée de calcium opérée par les stocks (SOCE) en interagissant avec STIM1 et en contribuant à l’inactivation dépendante du Ca2+ des canaux Orai1. En ajustant la signalisation calcique cytosolique, SARAF influence des voies en aval liées à l’expression génique, la sécrétion, le métabolisme et l’adaptation au stress, notamment l’homéostasie du RE et la dynamique de la réponse aux protéines mal repliées (UPR). Une SOCE dérégulée et une gestion altérée du calcium du RE sont impliquées dans plusieurs processus pertinents pour les maladies, tels qu’une prolifération aberrante, une activation modifiée des cellules immunitaires et une vulnérabilité accrue au stress oxydatif et protéotoxique. SARAF/TMEM66 constitue donc une cible utile pour des études mécanistiques reliant les flux de calcium aux décisions de destinée cellulaire et au remodelage des réseaux de signalisation.
TMEM66 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus SARAF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de SARAF. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de SARAF. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de SARAF.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.