TMEM65 Double Nickase Plasmid (h): sc-406584-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TMEM65 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TMEM65 Double-Nickase-Plasmid (h) und TMEM65 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TMEM65 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TMEM65 Double Nickase Plasmid (h) | sc-406584-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TMEM65 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-406584-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TMEM65 kodiert ein Protein der inneren Mitochondrienmembran, das an der Aufrechterhaltung der mitochondrialen Architektur beteiligt ist und die oxidative Phosphorylierung unterstützt, mit nachgelagerten Auswirkungen auf die ATP-Produktion und das zelluläre Redoxgleichgewicht. Durch die Beeinflussung der Organisation mitochondrialer Proteine und der Funktion der Atmungskette trägt TMEM65 zu Prozessen wie der Regulation des Membranpotenzials und der mitochondrialen Homöostase bei. Eine veränderte TMEM65-Aktivität wurde mit bioenergetischen Funktionsstörungen und Phänotypen in Verbindung gebracht, die mit Mechanismen mitochondrialer Erkrankungen vereinbar sind, was es für Studien zu neuromuskulären und kardiometabolischen Stressantworten relevant macht. Seine mitochondriale Lokalisation macht es zudem zu einem nützlichen Ansatzpunkt, um Signalzusammenhänge zwischen mitochondrialer Dysfunktion, Proteostase und zellulären Anpassungswegen zu untersuchen.
TMEM65 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TMEM65-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TMEM65 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TMEM65-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TMEM65-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.