Plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM63B (h): sc-412530

Présentation

TMEM63B code la protéine transmembranaire 63B, une protéine membranaire multipasse impliquée dans la signalisation mécanosensible et l’osmorégulation via une activité de canal perméable aux ions. Elle contribue à l’homéostasie cellulaire en reliant les variations de tension membranaire et de volume à des processus en aval dépendants du Ca²⁺, influençant l’excitabilité neuronale, la dynamique du cytosquelette et les voies de réponse au stress. L’expression de TMEM63B est enrichie dans le système nerveux et a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, ce qui la rend pertinente pour l’étude de la fonction synaptique et de la transduction sensorielle. Des altérations de l’activité de TMEM63B ont également été explorées dans le contexte de la migration cellulaire et du trafic membranaire, ce qui étaye des rôles plus larges au sein de réseaux de signalisation spécifiques des tissus.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TMEM63B (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TMEM63B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TMEM63B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TMEM63B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TMEM63B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TMEM63B pour l'étude de la signalisation de TMEM63B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TMEM63B essentiels à la fonction de TMEM63B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TMEM63B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TMEM63B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le TMEM63B plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TMEM63B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TMEM63B plasmide HDR (h) et le TMEM63B (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TMEM63B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TMEM63B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.